ХРОМАТОГРАФІЧНЕ РОЗДІЛЕННЯ АМІНОКИСЛОТ

Хроматографія - метод поділу та ідентифікації хімічних речовин, при якому речовини поміщають в систему, яка містить два фізично різних компонента: рухливу і нерухому фази, де поділ за типами молекул відбувається за рахунок відмінностей в розподілі між двома цими фазами.

Хроматографія підрозділяється на ряд видів: адсорбционную, розподільну, іонообмінну, на молекулярних ситах, в яких реалізуються різні методичні підходи: колоночная, на папері, тонкошарова, газова. Цілі і завдання хроматографії можуть бути аналітичні і препаративні.

Найбільш прийнятним для поділу амінокислот є метод адсорбційної іонообмінної хроматографії.

Аналіз суміші амінокислот в лабораторній практиці часто починають з поділу цієї суміші на компоненти на хроматографічної колонці, що представляє собою довгу трубку, заповнену гранулами іонообмінної смоли, яка виконує роль сорбенту амінокислот. Іонообмінні смоли в залежності від пов'язаних з ними іонних груп поділяються на катіонообмінні - ті, що мають пов'язані аніони, наприклад, залишки сульфоновой кислоти (рис. 3.3) - і аніонообмінні - зі зв'язаними катіонами (наприклад, іони Na + ).

Схема обміну іонами на смолах

Мал. 3.3. Схема обміну іонами на смолах

При проведенні аналізу невелику кількість суміші вносять у верхню частину колонки. Потім через колонку пропускають буферний розчин (для катіонообменних смол буфер кислий з pH близько 3). Амінокислоти проходять через колонку з різними швидкостями, оскільки їх рух гальмують два фактори: електростатичне тяжіння між негативно зарядженими залишками сульфоновой кислоти і позитивно зарядженими функціональними групами амінокислот і гідрофобна взаємодія між бічними ланцюгами амінокислот і сильно гідрофобним складом смоли. В результаті різні амінокислоти елюіруются (вимиваються) з колонки і детектируются на аналізаторі (як правило, спектрофотометрически) в різні моменти часу. Результатом аналізу є хроматограмма (рис. 3.4).

 
Переглянути оригінал
< Попер   ЗМІСТ   ОРИГІНАЛ   Наст >