ОСМОМЕТРІЧЕСКІЙ МЕТОД ВИЗНАЧЕННЯ МОЛЕКУЛЯРНОЇ МАСИ БІЛКА.

На підставі

різних експериментальних досліджень, що включають титрування, електрофорез та інші методи, встановлюються значення дуже важливих параметрів для білків - ВЕТ і молекулярної маси. Величина молекулярної маси білків коливається від 6000 до кількох мільйонів. У табл. 3.5 наведені значення цих параметрів для деяких білків.

Таблиця 3.5

Значення pH в ізоелектричної точки і молекулярна маса для деяких білків

Назва білка

Молекулярна маса білка, г / моль

ВЕТ

міоглобін кашалота

17 600

7,0

пепсин

35 000

1,1

альбумін яйця

40 000

4,6

гемоглобін коні

: 68 000

6,6

уреаза

483 000

4,9

На явищі осмосу, розглянутого в гл. 2 (див. Рис. 2.2), заснований осмометріческій метод визначення молекулярної маси білка, що полягає у вимірюванні осмотичного тиску на осмометрі (рис. 3.8). Залежність між осмотичним тиском і молекулярною масою має вигляд

де М - молекулярна маса, г / моль; з - концентрація, моль / л; R - універсальна газова постійна; Т - температура експерименту, К; я - осмотичний тиск, Па.

Схема роботи осмометрі

Мал. 3.8. Схема роботи осмометрі

Цим методом можна визначити ступінь полімеризації (СП) - число молекулярних ланок в полімерній молекулі. СП = М Рг / М ср ( лк) = 10 2 ... 10 4 , де Мр, - молекулярна маса поліпептиду; М ср (А к) - середня молекулярна маса амінокислоти (АК), як правило, рівна і 110 г / моль.

Діаліз. Для відділення низькомолекулярних домішок або заміни середовища використовують діаліз. Метод заснований на тому, що великий розмір молекул білка не дозволяє їм проходити через напівпроникні мембрани, а низькомолекулярні речовини легко дифундують і рівномірно розподіляються між обсягом, обмеженим мембраною, і оточуючим розчином (рис. 3.9). Після багаторазової заміни зовнішнього розчину складу середовища в диализном мішечку, виконаному з напівпроникною мембрани (pH, концентрації солей і т. П.), Буде відповідати складу навколишнього розчину.

схема діалізу

Мал. 3.9. схема діалізу

Висолювання. Розчинність білків сильно залежить від іонної сили розчину (концентрації солей). У дистильованої воді білки погано розчиняються, а при додаванні солей в розчин (в міру збільшення його іонної сили) їх розчинність зростає. Це явище обумовлене тим, що при підвищенні іонної сили гідратованих неорганічні іони зв'язуються з поверхнею білка і тим самим знижують ступінь агрегації білкових молекул між собою. Таке явище носить назву висолювання. При високій іонній силі молекули білка позбавляються гидратирующие оболонок, молекули злипаються (відбувається агрегація) і, як наслідок, білок випадає в осад (висолювання). Використовуючи відмінність залежностей розчинності білків від іонної сили розчину, можна Фракціоновані суміш білків. Таким чином, висолювання є методом виділення білків.

 
Переглянути оригінал
< Попер   ЗМІСТ   ОРИГІНАЛ   Наст >